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    附件一:《RNA類高通量測序樣品要求》
    RNA 提取類組織及其他樣品:

    1.1  對于需要進行 RNA 抽提的樣品,請使用新鮮取樣的實驗材料,當場分成小塊(動物樣品厚度需小于0.5 cm,植物樣品厚度需小于0.3 cm)后立即用液氮或干冰乙醇速凍,保存于-80°C 冰箱,埋于足量的干冰(根據經驗,在秋冬季節,如果打包合適,5 公斤塊狀干冰可以維持 50 小時,而小塊的干冰能更好的包裹樣品,但需比塊狀干冰多加些)中用保溫箱寄送。一般組織樣品,送樣量至少200 mg/樣;如果樣品屬于孢子,送樣量至少500 mg/樣。

    1.2  對于微生物樣品,請客戶如實聲明所屬物種;對于可能致病的微生物,生工將拒收。以固體培養基培養的樣品,需將樣品從培養基上刮取下來,用干冰寄送;以液體培養基培養的樣品,需離心后棄培養液收集樣品,用RNA組織保存液(例如RNA-Be-Locker A)保存,以干冰或冰袋寄送;沒有RNA組織保存液的情況下,也可用液氮或干冰乙醇速凍,保存于-80°C 冰箱,埋于足量干冰寄送。真菌樣品送樣量需至少達到100 mg/樣;細菌樣品送樣量需至少達到107(10的7次方)數量級,同時,在與樣本一同寄送的送樣表上,標明屬于革蘭氏陽性菌(G+)還是革蘭氏陰性菌(G-)。

    1.3  對于細胞樣品,送樣量需達到 5 × 106(5乘10的6次方)數量級。富集后置于 2 ml Ep管中,用 1 ml TRIzol 重懸,注意取樣后立即用液氮或干冰乙醇速凍,保存于-80°C 冰箱,埋于足量的干冰中用保溫箱寄送。強烈建議細胞樣品先做細胞鑒定及支原體/衣原體污染之后,再送出來。

    1.4  對于血液樣本,僅接收未凍存過的抗凝血新鮮樣本??鼓齽┎豢墒褂酶嗡剽c,可用EDTA或ACD抗凝劑,取血后以冰袋保存,切記不能使血液凍結,從取血之時開始計算,須在48小時之內送達生工上??偛扛咄繙y序部。如果不能提供新鮮樣本,則請提供從血液中提取的總RNA樣本。備樣要求詳見B、RNA 樣品。

    1.5  對于用RNA組織保存液寄送的樣品,請按照RNA組織保存液說明保存和寄送。請注意:

    1)  樣品浸入組織保存液之前,對于動物組織樣品,須以最快速度將樣品剪切成厚度小于0.5 cm 的碎塊;對于植物樣品,須以最快速度將樣品剪切成厚度小于0.3 cm 的碎塊。

    2)  鼠肝、腎和脾等小器官樣品和沒有蠟質保護層的植物樣品可不剪切直接放入保存液中保存,有蠟質保護層的植物樣品需要先將蠟表皮破壞。

    3)  確保將樣品完全浸泡在保存液中,不讓其粘貼在管壁和蓋上。

    1.6  對于需要進行RNA抽提的部分特殊樣品,可以將組織在液氮中研磨后用TRIzol懸浮后用普通冰袋寄送,具體情況請先溝通技術支持人員。

    1.7  請注意選擇無RNA酶的容器盛放樣本,盡量避免RNA降解。

    1.8  請寄送樣本(尤其是細胞樣本)之前鑒定樣本所屬物種。

    RNA樣品:

    2.1  請務必提供每個樣品具體的濃度、體積、制備時間以及物種來源。最好附上電泳膠圖或者 Agilent Bioanalyzer 儀器檢測數據等;

    2.2  對于普通轉錄組樣品,請提供濃度≥100 ng/µl、總量≥2 µg 的總 RNA 樣品,樣品請去蛋白并進行 DNase處理;一般情況下,普通轉錄組測序需要 RNA 樣品的 OD260/OD280為 2.0~2.2,Agilent Bioanalyzer 2100 器檢測獲得的總RNA 28S:18S≥1,RIN≥8;

    2.3  對于全長轉錄組測序樣品(ISO-seq),請提供濃度大于200 ng/ul,總量大于5 μg的總RNA樣品。樣品請去蛋白并進行 DNase 處理;全長轉錄組測序需要 RNA 樣品的 OD260/OD280 為 2.0~2.2,2.3Agilent Bioanalyzer 2100 器檢測獲得的總RNA 28S:18S≥1,RIN≥8.5;

    2.4  對于全轉錄組測序及小RNA測序樣品,請提供濃度≥100 ng/µl、總量≥2 µg 的總 RNA 樣品,樣品請去蛋白并進行 DNase 處理;一般情況下,需要 RNA 樣品的 OD260/OD280 為 2.0~2.2,Agilent Bioanalyzer 2100 器檢測獲得的總RNA 28S:18S≥1,RIN≥8;特別申明:不能采用過柱離心的方法提取總RNA。

    2.5  寄送 RNA 樣品請置于 1.5 ml 離心管中,管上注明樣品名稱、濃度以及制備時間,管口使用 Parafilm 封口。

    注意:

    在運輸前將所有樣品管集中放于大包裝中。使用足量的干冰運輸,并且盡量選用較快的郵遞方式,以降低運輸過程中樣品降解的可能性。

    注意事項:

    * 請務必標記清楚并隨樣品附上附件二中的《樣本信息表》。

    請務必確保樣品不要在休息日到達生工上??偛?,以免耽誤樣品處理,造成 RNA 降解。

    樣品請自行保留備份,以便在出現外源污染或異常的情況時能迅速查清原因。項目完成數據提交后,我方不保存樣品,項目結束一個月后將予以清理。

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