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    熒光定量PCR

    服務簡介

    熒光定量PCR 技術,是通過在PCR 反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號的變化實時監測PCR 擴增反應中每一個循環擴增產物量的變化,對起始模板進行定量分析的方法。實驗采用兩種定量方式,即絕對定量和相對定量。熒光定量PCR 可用于mRNA 表達量水平檢測、MicroRNA 表達量水平檢測和基因拷貝數檢測。實驗的方法可分為SYBR Green I 法和TaqMan 探針法。實時熒光PCR技術已廣泛應用于臨床及生命科學研究的各個領域中。在科研方面可定量分析各種基因的表達分析,基因突變和多態性分析,單核苷酸多態SNP測定及易位基因的檢測;在醫療方面可用于免疫組化分析、臨床疾病早期診斷、病原體檢測、耐藥性分析、腫瘤微小殘留病變研究等。

    熒光定量PCR常用術語:

    --基線: 實時熒光定量PCR反應的基線是指在PCR的最初幾個循環中(-般為3-15個循環) 的信號水平。此階段的熒光信號變化量極小。低水平的基線信號相當于反應的背景或噪聲。每個實時熒光定量PCR反應的基線應通過用戶分析或擴增曲線自動分析,根據經驗確定?;€的設置,會影響到熒光閾值及Ct值。

    --熒光閾值: 熒光閾值是在熒光擴增曲線上人為設定的一個值,它可以設定在熒光信號指數擴增階段任意位置上,一般熒光閾值默認是PCR 3-15個循環熒光信號標準偏差的10倍。

    --Ct值: Ct值指的是PCR擴增過程中擴增產物的熒光信號達到設定的閾值時所經過的循環數。

    --標準曲線: 標準曲線是標準物質的物理/化學屬性跟儀器響應之間的函數關系。對已知拷貝數的標準樣品做系列稀釋,對不同稀釋度的標準樣品進行熒光定量PCR并記錄Ct值,根據Ct值及拷貝數的對數繪制得到標準曲線,標準曲線的縱坐標代表起始拷貝數的對數,橫坐標代Ct值。

    技術支持

    電話:021-57072013
    Email:service3@sangon.com

    主要流程

    定量PCR引物(客戶提供或委托合成)
    DNA/RNA抽提
    定量(或RNA反轉錄)
    PCR預實驗
    正式上機定量實驗
    結果及數據分析

    訂購信息

    服務名稱 服務內容 周期 報價
    基因組DNA水平基因拷貝數檢測 總DNA提取、引物設計、 熒光定量PCR及數據處理全套實驗 3-4周 詢價
    轉錄組mRNA水平基因拷貝數檢測 總RNA提取、引物設計、通用引物反轉錄、 熒光定量PCR及數據處理全套實驗 3-4周
    轉錄組miRNA水平基因拷貝數檢測 總RNA提取、引物設計、特異引物反轉錄、 熒光定量PCR及數據處理全套實驗 3-4周

    客戶提供

    提供樣本

    細胞:細胞數>10^6;

    組織:總量>100 mg;

    DNA 或RNA 樣品:總量>2 μg。

    可選樣本引物:可由客戶提供,沒有引物的情況下,可由生工生物設計合成

    提供信息

    靶基因信息:包括基因序列或GenBank Accession Number 等;背景資料:包括生物物種信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 來源、基因豐度等。

    最終交付

    交付報告

    實驗報告:包括實驗方法、步驟、所用試劑、儀器、照片及相關分析數據等。

    部分結果展示

    內參GAPDH梯度稀釋樣品擴增

    熔解曲線結果

    標準曲線結果

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